7 ～ 14 日龄仔鸡各器官尚未发育完全，极易出现各种慢性呼吸道传染病（CRD），此阶段的临床预防效果直接关系到仔鸡存活率和经济效益。鸡败血霉形体是引起鸡接触性慢性呼吸道传染病的病原微生物。霉形体随空气进入呼吸道，吸附到动物纤毛和上皮细胞表面，产生多种代谢物质及有毒物质，可耗尽氨基酸、脂肪酸和DNA 前体，影响呼吸道黏膜上皮细胞的正常功能。霉形体还能下移至肺和气囊，引起肺和气囊的病变。CRD 的临床特征为咳嗽、流鼻液、气喘、呼吸杂音等，死亡率不高，但常引起屠宰废弃率增高，胴体降级，饲料转化率、产蛋量、受精率和孵化率下降。目前该病与大肠杆菌病、金黄色葡萄球菌病成为危害养鸡业尤其是肉鸡养殖最为严重的三大传染性疾病，至今尚无效果确实的疫苗，用抗菌药物对患病鸡进行预防仍是当前国内外规模化养禽的主要手段。
     阿奇霉素自2003 年在国内兽医临床上应用后，对防治鸡败血霉形体病、葡萄球菌病等传染性疾病取得了很好的效果，但体外抑菌试验在国内兽药杂志还未见报道。临床上应用一般参照罗红霉素和红霉素的剂量，普遍存在过量添加和盲目使用的现象。为了给养殖生产提供可参考的剂量，特选鸡败血霉形体、金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌进行药敏试验，为其今后在禽病防治推广应用中提供可参考的理论依据。
一、材料与方法
   （一）菌种 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌由浙江省金华市食品药品监督管理局药监所提供，源自中国药品生物制品检定所。鸡败血霉形体由金华理工学院临床分离得到作为供试菌株。
   （二）培养基 MH 肉汤培养基( 批号060904)、营养琼脂培养基( 批号060213) 由北京三药科技开发公司生产。
   （三）供试药品 阿奇霉素(1 000IU/mg，200609101)、5% 硫氰酸红素（200701151）由浙江省金华市奥奇物化学有限公司提供。
    （四） 仪器 智能生化培养箱，PHX-250B，山东鄄城科源仪器设备厂；不锈钢手提式灭菌锅，DSX-280，上海中安医疗器械厂；净化工作台，Forma Class Ⅱ，A2，ThermoElectron Corporation。
   （五）二倍稀释法
   1. 培养基的制备。取MH 肉汤培养基25 g， 加1 L 蒸馏水， 分装，121℃高压灭菌15 min，配制后每升肉汤培养液中含酸水解酪蛋白胨17.5 g、可溶性淀粉1.5 g、牛肉浸粉6 g，pH值为7.4±0.1 ；取营养琼脂培养基34 g，加1 L 蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15 min，配制后每升营养琼脂培养基中蛋白胨10 g、琼脂粉14 g、氯化钠5 g、牛肉浸粉 5 g，pH值为 7.1±0.1。
   2. 试验菌液的制备。保持实验整个过程无菌操作，取斜面培养物接种至10 ml 营养肉汤培养基中，置37℃培养24 h， 用1 ml 刻度吸管混匀培养物，吸1 ml 至9 ml 装的灭菌0.9%生理盐水管中（1∶10），换一支吸管，混匀， 吸1ml 到另1 支0.9% 生理盐水管中（1∶100），换1 支吸管，以此类推，直至稀释至各菌液浓度为1×103 ～ 105 cfu/ml，阴凉干燥保存备用。
   3. 供试液的制备。5 mg 阿奇霉素
     阿奇霉素对常见致病菌的体外药敏研究溶解于灭菌的 2.5 ml 95% 酒精中，用灭菌水溶液定容至0.512 mg/ml 备用。

  
   4. 最低抑菌浓度的确定。准备一系列装有1 ml MH 肉汤培养基的试管，在第1 管中加入0.512 mg/ml 的供试液1 ml，混匀后吸取1 ml 加入第2 管中，依此类推；另外设立阳性对照管和空白对照管。
     取上述菌液0.1 ml 于抑菌试管中，混匀，使试验菌和药液能充分接触，然后放在生化培养箱中37℃下培养24 h。若培养后的试管呈现澄清且摇匀后仍为澄清的可认为该管无菌生长，相反呈现浑浊状态，可断定有菌生长；从无菌生长的试管中找出最低药物浓度的试管，此浓度即为低抑菌浓度。
   5. 最低杀菌浓度的确定。在上述未见细菌生长的各管培养物吸取0.1 ml 涂布于合适的琼脂培养基平板上，在37℃下培养24 h，当平板上的菌落数小于5 个的最低抑菌浓度可断定为最低杀菌浓度。
二、结果
     体外药敏试验结果见表1。阿奇霉素对败血霉形体、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为0.125、0.5、1.0 g/ml， 最低杀菌浓度（MBC） 分别为0.5、16、2 g/ml。
     阿奇霉素对鸡败血霉形体和大肠杆菌的 MIC 和 MBC 均小于红霉素，显示出较强的抗菌作用（见图1，图2）；阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的MIC 与红霉素相近，而MBC则大于红霉素，表明对金黄色葡萄球菌的抗菌效果与红霉素相当或稍差（见图3）。

  
三、讨论
       鸡败血霉形体介于病毒与细菌之间，没有细胞壁，不需要宿主细胞生存，可在无细胞培养基里生存，能分裂繁殖，具有DNA 和RNA，能阻碍病原微生物细胞壁合成的抗生素如青霉素对其无效。因此在配制霉形体液体培养中有学者建议加入青霉素抑制杂菌的生长。
     阿奇霉素为第2 代半合成的红霉素A 的衍生物，抑菌机理为抑制蛋白质的合成，其抗菌谱及抗菌作用与红霉素相似。国内外对其的药代动力学特点研究显示，该药广泛分布于心、肺、肝、肾、肌肉等组织，特别是肺组织药物浓度非常高，且其抗菌谱广、抗菌活性强。试验结果表明，阿奇霉素对霉形体最小抑菌浓度≤ 0.125 μg/ml，最低杀菌浓度≤ 0.5 μg/ml，而红霉素分别为 0.5、2 μg/ml，提示阿奇霉素对鸡败血霉形体在体外有极强的杀菌作用，故提示该药可作为败血霉形体病治疗的首选药物。阿奇霉素对大肠杆菌最小抑菌浓度≤ 1 μg/ml，最低杀菌浓度≤ 64 μg/ml，对应的红霉素则为 2、128 μg/ml，显示出阿奇霉素对大肠杆菌的体外抑菌作用强于红霉素。红霉素防治鸡葡萄球菌感染、大肠杆菌感染等具有很好的疗效，为畜牧业的发展作出了巨大贡献。试验结果也显示红霉素对金黄色葡萄球菌的体外MIC、MBC ≤ 0.5、8 μg/ml，稍强于阿奇霉素的 0.5、16 μg/ml。但随着红霉素在生产上长年使用及滥用，金黄色葡萄球菌通过质粒转移细菌使耐药性大幅度提高，加口服吸收差、血液及组织中药物度不高，会影响临床控制鸡葡萄球菌病的效果。而阿奇霉素在酸中稳定， 其药物动力学呈多房室模型，组织渗透性好， 在细胞和组织中的浓度可超过血浆浓度 10 ～ 100倍，其血药峰浓度及生物利用度是
     目前大环内酯类在畜禽应用中最高的。Pechere 认为，尽管阿奇霉素的MIC 有时略低于红霉素或罗红霉素，但阿奇霉素具有非常高的生物利用度可以保证阿奇霉素的抗菌活性强于同类抗生素。此外，Carceles 也证实即使阿奇霉素的血清浓度低于MIC， 对多种G+ 和G- 仍然具有很强的抑制作用。所以在兽医临床上还是可以优先考虑用来防治由金黄色葡萄球菌引起的感染。
     本研究测定最小抑菌浓度采用管二倍稀释法，由于试验误差的存在导致所测定的MIC 值不是一个准确的值，但能说明所测定的值接近于最小抑菌浓度的真实值。另外最小抑菌浓度的测定结果可能会受到培养基pH 值、细菌接种量、湿度及观察试验结果时间的影响。从本试验的结果上看，阿奇霉素对鸡败血霉形体高度敏感，可以用于鸡慢性呼吸道病的治疗，对大肠杆菌的体外抗菌效果强于红霉素，对金黄色葡萄球菌的敏感程度与红霉素稍弱，但本实验所得结果为体外抑菌试验结果，药物进入动物体内后，能否达到有效的抗菌效果，还有待于进一步研究。

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